Comptage UFC et dilutions décimales
Des colonies comptées à la concentration (UFC/mL), ou la dilution décimale qui rend une boîte comptable (30 à 300).
Résultat
1,5 × 10⁹ UFC/mL
- Calcul
- 150 × 10⁶ / 0,1 mL = 1,5 × 10⁹ UFC/mL
- Fourchette comptable
- entre 30 et 300, comptable
- Dilution à étaler
- 10⁻⁶
- Une colonie vaudrait
- 1 × 10⁷ UFC/mL
Remarque
La boîte porte 150 colonies, dans la fourchette comptable : la culture titre 1,5 × 10⁹ UFC/mL.
Calcul, hypothèses et sources
PrésentationNumération bactérienne sur boîte : UFC/mL = colonies × 10^d / volume étalé, où d est le nombre de dilutions décimales.
Numération bactérienne sur boîte : UFC/mL = colonies × 10^d / volume étalé, où d est le nombre de dilutions décimales. Le calcul donne la concentration d'une boîte comptée, en vérifiant la fourchette comptable (30 à 300 colonies), ou la dilution à étaler pour qu'une culture attendue y tombe. Une boîte vierge est rendue « inférieur à la limite de détection ».
Méthode & formulesUFC/mL = N × 10^d / V
Chaque colonie visible est née d'une unité formant colonie déposée sur la gélose ; le compte, remonté le long de la cascade de dilutions, redonne la concentration de départ. La deuxième formule, inverse de la première, sert à choisir la dilution.
- UFC (unité formant colonie)
- ce qui donne une colonie : une cellule isolée, une chaîne ou un amas entier.
- Dilution décimale
- un saut au dixième : 1 mL de culture dans 9 mL de diluant. d sauts successifs diluent d’un facteur 10^d.
- Fourchette comptable
- les 30 à 300 colonies par boîte où le compte est fiable.
- Limite de détection
- la concentration que vaudrait une seule colonie sur la boîte.
Domaine de validitéLa numération compte le viable cultivable : les cellules stressées mais vivantes (état VBNC) ne poussent pas.
La numération compte le viable cultivable : les cellules stressées mais vivantes (état VBNC) ne poussent pas. Le calcul suppose des dilutions exactes ; l'erreur de pipetage de chaque saut se cumule le long de la cascade, et six dilutions à 2 % chacune font 12 % sur le résultat. La fourchette comptable vaut pour des colonies ponctuelles, pas pour les germes envahissants (Proteus) qui tapissent la gélose.
La fourchette de 30 à 300 coloniesLes colonies tombent sur la gélose au hasard : le compte suit une loi de Poisson, d'incertitude relative 1/√N, soit 18 % à 30 colonies et 32 % à 10.
Les colonies tombent sur la gélose au hasard : le compte suit une loi de Poisson, d'incertitude relative 1/√N, soit 18 % à 30 colonies et 32 % à 10. Au-dessus de 300, les colonies se touchent et fusionnent, et le compte sous-estime. Les comptes d'une série décimale baissent d'un facteur 10 par dilution et la fourchette couvre une décade : une boîte de la série y tombe toujours.
Lecture du résultatUne culture saturée d'E. coli contient environ 10⁹ UFC/mL.
Une culture saturée d'E. coli contient environ 10⁹ UFC/mL. En routine, on étale deux ou trois dilutions encadrantes. Le volume standard est 0,1 mL pour l'étalement en surface, 1 mL pour l'ensemencement en profondeur.